在2019年12月m6a rna甲基化研究总结中我们介绍了一篇较为罕见的做组织m6a merip-seq的文章，发表在european journal of heart failure (if:13.965)杂志上。这篇文章主要展示了健康状态下和心力衰竭状态下人及小鼠心脏m6a rna甲基化修饰图谱的信息。
主要研究内容及结果如下
1.健康小鼠心脏的m6a图谱利用merip-seq分析了5只成年小鼠心脏样本中m6a修饰的转录本比例（图1b），对m6a peak进行motif分析发现了一致性的rrach（图1c）。对m6a peak的分布区域进行分析发现主要富集在翻译终止位点（图1d），然后对富集在5’utr、cds区及3’utr的转录本进行富集分析（图1f）以及与表达水平的相关性分析（图1g），发现分布区域不同，富集的通路和表达相关性也会有差异。
3.健康人心脏的m6a图谱m6a修饰相关酶mettl3、mettl14和fto在人类心脏中均有表达（图3a）。对人非心力衰竭的心脏样本（n = 5）进行merip-seq发现大量转录本含有m6a修饰（图3b），motif分析也发现了一致性的rrach（图3c）。这些转录本中m6a分布与小鼠中类似（图3d），相同的转录本中多数m6a修饰位于cds区和5’utr区，而特有的一些转录本修饰在3’utr区（图3e）。分布区域不同，富集的通路和表达相关性也会有差异（图3f、g）。与小鼠的数据相似，5’utr和cds区发生m6a修饰的转录本水平和修饰水平存在一定相关性，而3’utr区没有显著相关性（图3h）。而健康小鼠和健康人的心脏样本间存在很多m6a修饰转录本的重合，主要富集在代谢相关的通路上，包括心脏和循环系统的发育等（图3i）。
4.心力衰竭人的m6a修饰变化
利用merip-seq和rna-seq比较非心力衰竭和晚期心力衰竭人的样本（每组n = 6），与小鼠数据相似，m6a修饰显著改变的转录本数目（n = 1246）要高于表达水平变化的基因（n = 228，图4a）。再对两组样本中差异甲基化转录本进行通路富集分析（图4b、c），以及人和小鼠两个物种重叠的差异甲基化的403个转录本进行通路富集（图4d）。
5.心力衰竭过程中差异的m6a修饰与变化的多聚体结合的转录本有关
有研究表明rna甲基化可能通过影响核糖体占有率来影响mrna翻译，为了进一步分析这项内容，研究人员利用多聚核糖体分析技术（polysome profiling）比较了tac诱导8周和对照组小鼠心脏组织中正在翻译的转录本（每组n = 5）。其中发现tac诱导8周后225个转录本在核糖体片段中显著富集或缺失，富集或缺失的转录本参与的通路也不相同（图5a）。tac组差异甲基化和差异核糖体结合的转录本显示显著正相关（图5b）。小鼠和人心力衰竭差异甲基化重叠的403个转录本与小鼠核糖体结合的转录本也有显著正相关（图5c）。富集分析发现这些转录本的通路对心脏功能和代谢过程是必需的（图5d）。分别利用qpcr、merip-qpcr、western blot验证了小鼠和人中部分基因的表达水平、m6a修饰水平和蛋白水平（图5e、f）。
6.fto敲除的小鼠显示更差的心脏表型
为了验证m6a水平确实对正常的心脏功能的影响，条件性敲除心肌细胞中的fto（图6a）。与对照组相比，条件性敲除小鼠显示出射血分数（图6b）、短轴缩短率（图6c）的显著下降，以及扩张程度的显著增加（图6d、e）。
关于天昊
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