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methyl target测序技术方案 

      甲基化是基因组中非常重要的表观遗传学标记信息，参与了包括基因调控、生物发育、疾病等众多的生理和病理过程，在大多数癌症中都广泛发现甲基化水平的异常。除了对于全基因组甲基化水平的观察与研究，对于众多目的候选基因的甲基化水平的研究则是更为具有针对性和打样品可行性的方案，但是由于传统的sanger测序通量和费用的限制，这一方案一直停留在较小的研究规模上。现在天昊生物结合目的区域富集和二代测序技术推出了自主研发的目的候选基因区域甲基化水平测序技术——methyl target^tm，这一技术不仅大大提高了数据通量，同时大幅度降低了研究费用。

技术优势：

      检测精度高：单碱基分辨率，精确分析每一个c碱基的甲基化状态；

      效率高，耗时少：借助二代测序高通量测序平台，对甲基化信息进行高效扫描；

      性价比高：相对于传统sanger测序方法，费用少。

      高质量的引物设计：运用公司的生物信息学平台快速、高质量地设计每一个引物，保证每个区域的富集质量。

      高准确性：我们充分运用miseq 2×300bp的测序长度和成熟的生物信息学分析手段，对每一个碱基进行分析矫正，保证每个碱基都能表达出最真实的甲基化信息。

技术路线

      1.dna质检：nanodrop仪器定量结合凝胶电泳检测。

      2.样本要求：样品需求量：≥1μg；样品纯度：od260/280=1.7-2.0；样本无明显降解。

      3.文库构建：bisulfite treatment——样本目标片段多重pcr反应——相同样本的多重pcr反应体系混合——样本添加特异性标签序列——定量后上机测序。

      4.上机测序：illumina miseq 2×300bp测序。

      5.生物信息学分析。